做實(shí)驗(yàn)的小伙伴，是不是經(jīng)常被“檢出限”、“定量限”這些概念搞得頭暈眼花？一份數(shù)據(jù)可不可靠，方法的靈敏度是關(guān)鍵。這篇文章，上海析譜儀器有限公司專業(yè)工程師帶來干貨滿滿的實(shí)操指南；幫你搞定分光光度法中檢出限的測定。
TU-1810紫外可見分光光度計(jì)
1.什么是檢出限
簡單來說，檢出限就是你的儀器和方法能夠“有把握地”檢測出待測物質(zhì)的最低濃度。
請注意關(guān)鍵詞：“有把握地”——它不是說儀器指針動(dòng)了一下就算檢出，而是指測出的信號(hào)能明確地區(qū)分于空白溶液的背景噪音，并且有足夠的置信度（通常是99%的置信水平）。
為什么它重要？評價(jià)方法性能：檢出限是衡量分析方法靈敏度的核心指標(biāo)之一。數(shù)值越低，方法越靈敏。判斷數(shù)據(jù)可靠性：當(dāng)樣品濃度低于檢出限時(shí)，你的檢測結(jié)果應(yīng)報(bào)告為“未檢出”（ND），而不是一個(gè)具體的數(shù)值，否則會(huì)誤導(dǎo)他人。滿足標(biāo)準(zhǔn)要求：很多行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和論文投稿都要求提供方法的檢出限。
2.三步算出檢出限
國際上最常用、也最規(guī)范的方法是 “空白標(biāo)準(zhǔn)偏差法”。別怕，公式很簡單，我們一步步來。
第1步：準(zhǔn)備空白溶液
這里的“空白”指的是不含待測物質(zhì)，但經(jīng)歷了全部實(shí)驗(yàn)流程的溶液。比如，你用某種試劑處理樣品，那么空白溶液就應(yīng)該加入等量的試劑，并經(jīng)過同樣的加熱、定容等步驟。關(guān)鍵：空白必須真實(shí)反映整個(gè)分析過程帶來的背景干擾。
第2步：連續(xù)測定空白信號(hào)
用上海析譜制造的紫外可見分光光度計(jì)TU1810，連續(xù)測定空白溶液的吸光度（OD值或吸光度A）至少10次（建議11-20次，次數(shù)越多統(tǒng)計(jì)結(jié)果越可靠）。記錄下每一次的測量值。
操作提示：
※ 保持儀器穩(wěn)定。
※ 每次測量前，都用同一個(gè)空白溶液沖洗比色皿。
※ 記錄數(shù)據(jù)要準(zhǔn)確。
第3步：計(jì)算與結(jié)果
現(xiàn)在輪到數(shù)學(xué)時(shí)間了，只需兩個(gè)公式：
1、計(jì)算空白信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）
把你測到的所有空白信號(hào)值（比如11個(gè)吸光度值）輸入計(jì)算器或Excel，直接使用 STDEV.S 函數(shù)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差。我們記這個(gè)結(jié)果為SD?（空白標(biāo)準(zhǔn)偏差）。
2、套用公式，計(jì)算檢出限（LOD）
公式：LOD = 3 × SD? / b
這個(gè)“3”就是統(tǒng)計(jì)學(xué)上99%置信度的系數(shù)，意味著信號(hào)強(qiáng)度是空白波動(dòng)范圍的3倍時(shí)，我們才敢說“真的測到了”。
注意：上面的LOD是以吸光度（A）為單位的，我們最終需要的是濃度！
3、將檢出限轉(zhuǎn)換為濃度單位
你需要知道方法的靈敏度，也就是標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率（b）。假設(shè)你的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程是
A =a + b×C（C是濃度），那么斜率就是b。
最終濃度檢出限（LOD?c?） = 3×SD? / b